?活動介紹
 
2024年6月18日，博興生物邀請安捷倫細胞分析事業(yè)部在深圳灣實驗室平臺部舉辦了2024年深圳第一場Seahorse XF 專場培訓(xùn)會活動，這也是在深圳辦的第二場Seahorse XF 專場培訓(xùn)，此次活動是基于對深圳區(qū)域用戶進行售后回訪收集反饋信息以及綜合當(dāng)前Seahorse XF的使用情況而展開的，此次活動旨在給客戶提供一個線下面對面溝通交流的機會，幫助客戶更加全面深入的了解Seahorse XF細胞能量代謝的技術(shù)原理以及其應(yīng)用領(lǐng)域。
 
活動現(xiàn)場
 
此次培訓(xùn)會安捷倫細胞分析應(yīng)用專家林鶴鳴分享了Seahorse XF 技術(shù)的原理、應(yīng)用介紹、數(shù)據(jù)分析處理及數(shù)據(jù)歸一化的理論部分,最后在儀器前進行了實際操作演示。
安捷倫 Seahorse XF 技術(shù)可實時進行功能性活細胞代謝分析，更直接地測量以及更深入地了解細胞過程。Seahorse XF 技術(shù)通過測量細胞代謝驅(qū)動因素的關(guān)鍵指標(biāo)簡化數(shù)據(jù)解析，并提供試劑盒和檢測等一站式解決方案，簡化工作流程。進一步了解研究人員如何在疾病建模、表型分析、靶標(biāo)鑒定與驗證、作用機制以及先導(dǎo)化合物發(fā)現(xiàn)中利用細胞代謝能量分析。

 

 

?合影?

 

此次培訓(xùn)會吸引了約30名來自多個單位的用戶老師參加，按照慣例，我們在會后進行了合影留念，此次培訓(xùn)會至此就告一段落了，但我們的服務(wù)遠沒有結(jié)束，有疑問歡迎咨詢博興生物技術(shù)支持。感謝安捷倫應(yīng)用專家親臨現(xiàn)場為大家?guī)砣绱藢I(yè)的技術(shù)培訓(xùn)。感謝深圳灣實驗室平臺提供培訓(xùn)場地。感謝各位老師撥冗前來參會學(xué)習(xí)。我們下期再會!!!
 
關(guān)于Seahorse數(shù)據(jù)歸一化
 
問;
為什么需要數(shù)據(jù)歸一化
答：
功能生物數(shù)據(jù)的歸一化是原始數(shù)據(jù)展示和后續(xù)分析工作流程中的關(guān)鍵因素，以確保對結(jié)果的準(zhǔn)確一致的解析。
Seahorse XF 代謝分析在這方面也是如此，實驗需要進行某種形式的歸一化。無論是比較不同的細胞類型、基因修飾還是化合物處理，都必須根據(jù)共同的參數(shù)將數(shù)據(jù)歸一化以便正確比較。Seahorse XF 可在包括細胞數(shù)、基因組 DNA 和總細胞蛋白質(zhì)的多個參數(shù)層面進行歸一化。本文主要介紹使用細胞數(shù)（或細胞數(shù)的替代參數(shù)）來歸一化 XF 速率數(shù)據(jù)（OCR、ECAR、PER）的方法。
01貼壁細胞數(shù)據(jù)歸一化方法
通過 Cytation 采集的圖像中的熒光標(biāo)記細胞核來測量每孔細胞數(shù)，此方法集成了XF 技術(shù)與 Cytation 細胞成像分析儀。
XF 成像和歸一化系統(tǒng)的典型工作流程如下：

具體請參考5994-0022ZHCN_Normalization App Note.pdf.(agilent.com.cn)
 

 

如圖 1A 所示，OCR 和 ECAR 隨接種密度成比例增加。完成 XF 分析后，通過 XF 成像和細胞計數(shù)軟件采集熒光圖像并計數(shù)，如圖 1B 所示。圖 1C 顯示了歸一化后的數(shù)據(jù)，其中將代謝速率除以軟件計數(shù)得到的細胞數(shù)。在應(yīng)用細胞計數(shù)歸一化因子后，OCR 和 ECAR 動力學(xué)曲線都發(fā)生重疊，特別是細胞加寡霉素和 FCCP 之前的基礎(chǔ)速率。因此，數(shù)據(jù)歸一化可以鑒定與細胞密度差異相關(guān)的真實生物學(xué)變化。如圖 1C 所示，F(xiàn)CCP 對 OCR 的影響隨細胞密度而變化，而寡霉素導(dǎo)致的 ECAR 升高不受細胞密度影響。
02 T 細胞等懸浮細胞的歸一化方法
懸浮細胞由于細胞核尺寸小，且造血來源的細胞不能有效地吸收Hoechst熒光染料，在使用進行熒光成像背景對比度較差，會影響計數(shù)的準(zhǔn)確性。而無標(biāo)記細胞成像計數(shù)技術(shù)，只有在亞匯合細胞密度下計數(shù)才可靠，而 Seahorse XF 方案通常建議需要接近完全的匯合下進行檢測分析，因此通過熒光成像或無標(biāo)記成像方式進行細胞計數(shù)的方法均不太適合。采用單細胞統(tǒng)計計數(shù)原理的流式細胞儀，來實現(xiàn)對懸浮細胞的計數(shù)就成為首選方法。因此，我們建議采用安捷倫的NovoCyte流式細胞儀進行活細胞計數(shù)，以達到 Seahorse XF 分析平臺進行數(shù)據(jù)歸一化的要求。
 
Seahorse XF與NovoCyte流式細胞儀進行數(shù)據(jù)歸一化的典型工作流程如下:

 

安捷倫 NovoCyte 流式細胞儀提供了一種簡單的解決方案，無需對流體系統(tǒng)進行復(fù)雜的校準(zhǔn)或使用參比微球，并且樣品之間的殘留最少。NovoCyte使用小樣品體積，提供總細胞和活細胞的準(zhǔn)確細胞計數(shù)。該方法允許在接種前調(diào)整細胞密度，以防初始懸浮密度超出推薦范圍。該工作流程還對最終懸浮液計數(shù)，該活細胞計數(shù)用于歸一化接種板。
 

歸一化設(shè)備推薦

 Cytation 系列成像儀

Cytation 系列細胞成像儀可提供放大倍數(shù)高達 60 倍的熒光和高對比度明場成像。XY 導(dǎo)軌、聚焦、曝光、圖像采集和 LED 強度均為全自動設(shè)置，簡便易用。BioTek 功能強大的 Gen5 軟件可以無縫采集用于定量發(fā)布的數(shù)據(jù)，無需進行大量培訓(xùn)。溫度控制在 45 °C，振蕩采用標(biāo)準(zhǔn)模式，可選 CO₂/O₂ 控制和注射器。Cytation 獨特的專利設(shè)計提供了定量的表型細胞圖像信息和出色的定量數(shù)據(jù)。